RAPD-PCRفصل عزلات جديدة من النيماتودات الممرضة للحشرات من فلسطين وتشخيصها بواسطة

تستخدم النيماتودا الممرضة للحشرات لمكافحة الآفات التي تسكن في التربة, بما أن هذه النيماتودا تظهر خاصية بينها وبني الحشرة وبسبب الحاجة لتحسين فعاليتها ومقاومتها للظروف البيئية فإنه من الضروري زيادة عدد العزلات والأنواع منها, مع ازدياد عدد الأصناف والعزلات تزداد الحاجة لطرق سهلة ومتعددة لتعريف وتصنيف هذه الكائنات. تم فصل عزلتين (Bethlehem11, Bethlehem22) من مناطق بيت لحم في فلسطين باستخدام طريقة الطعوم "trapping" لعثة الشمع. تم تعريف العزلتين الجديدتين Heterorhabditis اعتماداً على تهجين ناجح crossing مع العزلة LN2 للنوع H.indica كانت نسبة التهجين الناجح لكل من العزلتين الجديدتين 66% مع العزلة LN2 new paras. اظهرت كل من العزلتين مقاومة للحرارة أكثر من H.hocteriophora المعزولة من مناطق مناخية معتدلة, حيث وصلت نسبة صمود الطور المعدي "IJS" في درجة حرارة 40ْ لمدة اربع ساعات إلى حوالي 80% لكل من العزلتين الجديدتين, بينما اقتربت إلى الصفر نسبة صمود الطور المعدي للنوع H.bacteriophora, عندما مكث لنفس الفترة في نفس درجة الحرارة. كانت قدرة إحداث المرض ‘’Infectivity’’ لكل من العزلتين الجديدتين أعلى بالمقارنة مع H.bacteriophora حيث كانت مقادير الـ LD50 للعزلة Bethlehem11 25 نيماتودا وللعزلة Bethlehem 22 55 نيماتودا وذلك بالمقارنة مع160 نيماتودا من نوع H.hocteriophora وذلك عند كشف يرقات عث الشمع للنيماتودا لمدة 26 ساعة, العزلتان الجديدتان هما أول محاولة لعزل نيماتود تمت في فلسطين. يمكن دراسة هذه العزلتين بهدف ملاءمتها لمكافحة الآفة المحلية Maladera matrida. تم فحص التقارب الجيني بين العزلتين الجديدتين مقارنة مع عزلات بطريقة RAPD-PCR اظهرت نتائج هذه الطريقة ان التشابه بين العزلتين الجديدتين هو 96.42%. وهذا يدل على كونهما عزلتين منفصلتين. هذا وقد أظهرت الطريقة ان هاتين العزلتين تختلفان عن عزلة أخرى من نفس النوع (H.indica,LN2) حيث يصل معدل تشابه إلى 85.66%. بالاضافة إلى ذلك اظهر اختلافا نسبيا بين جميع H.indica المفحوصة من ناحية وعزلة من الفصيلة Steinernema من ناحية اخرى. يعتبر هذه الاختلاف طبيعيا لأن العلاقة بين المجموعتين هي بمستوى الفصيلة. طريقة ال RAPD- PCR لوحدها لا تكفي لتشخيص نوع أو عزلة جديدة غير معروفة. ويعود ذلك إلى الحقيقة ان هذه الطريقة يمكن احيانا ان تظهر مستوى التشابه القائم بين نوعين مختلفين بنفس مستوى التشابه القائم بين عزلتين من نفس النوع. من ناحية اخرى يمكننا استعمال هذه القائمة للتمييز بين عزلتين غير معروفتين.